以CRISPR/Cas9與體細胞核轉置技術產製肌肉生長抑制素基因編輯之 馬隻複製胚

報告時間:2024-09-25
報告地點:大四教室
指導老師:唐品琦
學生:杜祥安
摘要

   基因編輯技術(gene edtion)之發展,有助於產製具有高肌肉、高運動性能之馬匹。已知動物肌肉生長抑制素(Myostatin,MSTN)為調節肌肉細胞增殖與分化之因子,其具有抑制肌肉生長與發育之功能。試驗設計2種針對Myostatin第一外顯子(exon 1)之gRNA/Cas9質體,並分別使用1、2與5 mg三種濃度轉染馬胚胎成纖維母細胞(fibroblasts),同時共轉染增強型綠螢光蛋白質質體(enhanced green fluorescent protein, EGFP)。試驗結果顯示,隨著gRNA/Cas9質體濃度增加,Myostatin基因編輯效率提高, gRNA1平均編輯效率為87.33%,而gRNA2為90.33%。選擇3株Myostatin基因編輯之fibroblasts進行體細胞核轉置,均可成功產製基因編輯之複製囊胚。與同樣經核轉移的間葉幹細胞、未經編輯之纖維母細胞相比,經編輯之細胞較不易發育至囊胚期。綜上所述,CRISPR/Cas9為一高效率、高準確性、高特異性以及具有劑量依賴性之基因組編輯方法,對於應用此技術產製基因編輯馬胚具有實際可行性。

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