論文宣讀

        做為精卵細胞前驅細胞之始基生殖細胞（primordial germ cells, PGCs），為攜帶遺傳物質之載體，其中雞隻PGCs（chicken PGCs, cPGCs）具有特殊之遷移模式，其衍生自上胚層（epiblast）並移動至下胚層（hypoblast），於HH13-15 stage進入雞胚血液循環系統，最終於HH 28-30 stage遷移至生殖嵴（germinal ridge）並坐落於此逐漸分化為生殖細胞，同時於這段移行期間，cPGCs亦進行大量增殖。由於PGCs攜帶遺傳物質且具有特殊遷移途徑，近年來被作為產製基因編輯動物之有力工具。以往研究發現，當雞隻生長激素受體（Growth hormone receptor, GHR）基因出現突變時，會出現體重下降、腿骨縮短之侏儒性狀（dwarf），而由於GHR基因位於Z染色體上，因此侏儒性狀為性聯遺傳（Sex-linked dwarf），然而由於侏儒雞隻於飼養管理上具有優勢，因為其飼料與飼養空間需求較小，且侏儒性狀不影響其產蛋率與子代表現，因此，本研究之目的除探討矮腳之性狀與基因表現差異，是否於雞隻早期發育便出現外，亦欲建立中興B系土雞之cPGCs，並以CRISPR-Cas9系統將GHR進行缺失突變，再以此基因編輯過之cPGCs產製矮腳中興B系土雞。試驗分析結果發現，中興L2系以及矮腳L2土雞兩品系間，其雞胚於孵化第8天、12天與孵化當日，生長表現均是矮腳L2較L2差， 但GHR下游基因，類胰島素生長因子（insulin-like growth factor 1, Igf-1）之表現量，不論在肌肉或肝臟中，矮腳L2與L2無顯著差異，與先前成雞研究中，Igf-1之表現量於矮腳雞較低有所差異，需後續深入研究。分離孵化5.5日雞胚之性腺，以胰蛋白酶消化後，移至含小鼠胚纖維母細胞飼養層（mouse fetal fibroblast feeder, MEF feeder）之培養皿中培養，過程中性腺基質細胞逐漸凋亡，而cPGCs繼續增生，繼代cPGCs數次後，其細胞數達10⁶以上則繼行細胞冷凍。將冷凍解凍後之cPGCs注射入E2.5雞胚背側動脈，3天後可於雞胚生殖嵴附近發現注射之cPGCs。後續將以構築之GHR CRISPR-Cas9 載體轉殖至培養之cPGCs，再移植至E2.5雞胚背以產製性腺嵌合雞，並透過其後代自交繁殖GHR缺失之後代，以建立矮腳B系土雞族群。
 
 
關鍵字: 性聯侏儒，始基生殖細胞，生長激素受體，台灣土雞

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